一、弓形蟲試劑盒用途及檢測方法簡述

弓形蟲?。═oxopLasmosis）由細胞內寄生的剛地弓形蟲引起，患者可能由食用污染的肉食或接觸含有卵囊的貓糞而得病。病原體可通過胎盤感染胎兒，導致先天性弓形蟲病，引起胎兒死亡或畸形。酶聯免疫檢測弓形蟲特異性抗體IgM，是鑒定弓形蟲病準確的血清學方法。

把純化了的弓形蟲抗原包被在微孔表面，加入經稀釋的患者血清樣品，若其中存在弓形蟲IgM抗體，它便與包被的抗原結合成為抗原-抗體復合物。用水洗去未結合物后加入底物和顯色劑，所產生顏色的強度與樣品中的抗體的量成正比。其結果通過酶標儀在平行檢測中與臨界校正液和對照品相比較而得出。

二、弓形蟲試劑盒試劑盒的組成

1.抗原包被的微孔板，1塊，96孔；

2.陰性對照：150μL，1瓶（無色蓋）；

3.臨界校正液：150μL，1瓶（黃色蓋）；

4.陽性對照：150μL，1瓶（紅色蓋）；

5．洗滌濃縮液（20X）：50ml，1瓶；

6．樣品稀釋液：22ml，1瓶；

7．酶聯試劑：12ml，1瓶；

8．TMB試劑：11ml，1瓶；

9．終止液（1N HCL）：11ml，1瓶。

三、弓形蟲試劑盒的保存和儀器

1．試劑盒在2-8℃下保存；

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中；

3．試劑盒在有效期內是穩定的；

4.試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應避免暴露在熱、陽光和強烈光線之中。

*警示與注意:

1.試劑盒的某些材料中可能含有潛在生物危險的組分,應按微生物學和生物醫學實驗室有關生物安全的規定進行操作和處理。

2.試劑盒僅用于實驗室。

3.勿用嘴吸移液管,禁止在樣品和試劑盒試劑操作區吸煙、吃東西。

4.本試劑盒中的各組分是一個完整的單位，不同批號的組分不能混用。

5.本試劑盒試劑中含有防腐劑*，*會與鉛、銅形成爆炸性的金屬化合物。

處理：用大量水沖洗。

四、弓形蟲試劑盒樣品的采集和制備

1.采集血樣并分離血清。

2.采集的樣品在2-8℃下保存7天，冰凍狀態下可保存6個月，血清樣品要避免反復凍融。

五、弓形蟲試劑盒試劑制備

1．使用前使所有試劑恢復至室溫（18-25℃，下同）；

2．制備洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液（20X），即50ml洗滌濃縮液（20X）用蒸餾水或去離子水稀釋至1000ml，已稀釋好的洗滌液在2-8℃下可保存一個月，用前混勻。

六、弓形蟲試劑盒檢測步驟

1．將所需微孔安全地放在支架上，建議：陰性對照、陽性對照、待檢樣品和臨界校正液按雙孔設置；

2．按1：40稀釋待測樣品、陰性對照、陽性對照和臨界校正液。方法是將5μl上述樣品分別加入到200μl樣品稀釋液中，充分混勻；

3．精密吸取100μl稀釋的血清樣品、臨界校正液和對照品加入相應的微孔中；取100μl樣品稀釋液加入到1A位置的微孔內，作為空白對照；輕敲微孔板，去除液體中的氣泡；

4．37℃下溫育30分鐘；

5．溫育完畢，把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液（1X）沖洗5次；

6．向每個微孔中加入100μl酶聯試劑，輕輕混合10秒鐘；

7．37℃下溫育30分鐘；

8．甩干每個微孔中的酶聯試劑，用稀釋的洗滌

緩沖液（1X）沖洗5次；

9．向每個微孔中加入100μlTMB試劑，輕輕混合10秒鐘；

10．37℃下溫育15分鐘；

11．向每個微孔中加入100μl終止液終止反應；

12．輕輕混合30秒鐘，此步確保所有藍色全部轉為黃色至關重要；

13．用酶標僅在450nm處于15分鐘內讀出光密度值。